بررسی میزان آلودگی سگ‌های خانگی به جنس کمپیلوباکتر با استفاده از تکنیک PCR
محورهای موضوعی : پژوهش های بالینی دام های بزرگ
کلید واژه: تکنیک PCR, کمپیلوباکتر, سگ خانگی,
چکیده مقاله :
در طی 30 سال گذشته، کمپیلوباکتر به عنوان شایعترین عامل باکتریال گاستروانتریت انسان در کشورهای توسعه یافته مطرح بوده است. در این میان سگ ها به عنوان ناقلین بدون علامت، نقش مهمی در انتقال این باکتری به انسان دارند. به همین دلیل و با توجه به مشکلات جداسازی باکتری تشخیص سریع و دقیق حیوانات آلوده مهم است. در این بررسی طی پاییز سال 1390، نمونه گیری از مدفوع 60 سگ سالم خانگی در شهرکرد انجام گرفت. بعد از استخراج DNA از نمونه های مدفوع، ابتدا توسط یک جفت پرایمر یونیورسال موارد مثبت که حاوی توالی نوکلئوتیدی خاص (توالی های اختصاصی در ژن های 16s rRNA ) جنس کمپیلو باکتر بود، شناسائی شد و سپس با تکنیک PCR، شناسایی گونه شایع کمپیلوباکتر در سگ (کمپیلوباکتر ژژونی) که در انسان بسیار بیماری زاست انجام گرفت. از مجموع 60 نمونه مدفوع سگ، 18 مورد (30 درصد) آلوده به کمپیلوباکتر بودند که از این میان کمپیلوباکتر ژژونی 33/8 درصد (5 مورد) از آلودگی ها را به خود اختصاص داد. با استفاده از نرم افزار SPSS با روش آنووای یک طرفه نشان داده شد که میزان موارد آلودگی به کمپیلوباکتر در بین سگ‌ها به صورت معنی داری زیاد می باشد. نتایج بررسی نشان داد که می‌توان از تکنیک PCR به عنوان روش تشخیصی سریع برای شناسایی باکتری های جنس کمپیلوباکتر و گونه های متعلق به آن در نمونه مدفوع حیوانات بیمار یا حامل استفاده کرد، بدون اینکه نیازی به کشت میکروبی و استفاده از آنتی‌بادی های متعدد و گرانقیمت باشد.
During the past 30 years, the Campylobacter has been the most common cause of gastroenteritis in developed countries. Dogs as asymptomatic carriers play an important role in transfering of bacteria to human. Therefore, rapid and accurate diagnosis of carrier animalsis important. During the autumn months of 2011 in Shahr-e-Kord city a total of 60 stool samples from healthy domestic dogs, in order to detection of Campylobacter were collected. After extraction of DNA from the stool samples, positive samples which contain nucleotide sequence related to Campylobacter spp. were identified using universal pair primers. Then identification of common species Campylobacter in dog (C.jejuni) which is highly pathogenic for humans was performed using PCR techniqe.Out of 60 samples, 30% (18 Case) were positive due to Genus Campylobacter. Hereof, Campylobacter jejuni allocated 8.33% (5 out of 18) of this Pollution. SPSS analysis was revealed that prevalence of Campylobacter is Significantly high in young dogs. This study showed that PCR technique can be used as an useful test for rapid diagnosis of Campylobacter spp. in stool samples of dog carriers or patients without the culture and expensive variety of Anibodies.
1- تاجبخش، ح. احمدی فخرزادگان، ف. نادعلیان م. ق.(1379): بررسی عفونتهای ناشی از کمپیلوباکتر فتوس زیرگونه فتوس در گوسفنداریهای اطراف تهران و اصفهان. مجله دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران. 3(55): صفحه 99-91.
2- رحیمی، م.ک. علمبیگی، پ. موسوی، ل. عدیمی، پ. طیبی، ز (1388): بررسی مبتلایان به اسهال خونی ازنظر عفونت با کمپیلوباکتر ژوژونی. مجله علوم پزشکی دانشگاه آزاداسلامی. 3(19). صفحه 315-212.
3- فروهش تهرانی، ه (1382): گزارش یک مورد مننژیت ناشی از کمپیلو باکتر فتوس در بزرگسالان. مجله علوم پزشکی ایران. 36 (10): صفحه 583-579.
4- فیض آبادی، م. دولت آبادی، س. (1384): بررسی میزان شیوع عفونتهای کمپیلوباکتریائی درکودکان مبتلا به اسهال در دو بیمارستان تهران وتعیین مقاومت داروئی سویه‌های جداشده، مجله پژوهشی دانشکده پزشکی. دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی. 29(3): صفحه 224-219.
5- مهدی زاده، م، اسکندری، س. (1388): نقش کمپیلو باکترژژونی در بروز کمپیلوباکتریوز، مجله علوم پزشکی کرمان، 2(33)، صفحه 196-188.
6- Denis, M., Soumet, C., Rivoal, K., Erme G., Blivet D., Salvat G., Colin, P., (2002): Development of am PCR assay for simultaneous identification of Campylobacter jejuni and C. coli. Letters in Applied Microbiology. 6 (29): 406-410.
7- Chaban, B., Ngeleka, M., Hill, J.E., (2010): Detection and quantification of 14 Campylobacter species in pet dogs reveals an increase in species richness in feces of diarrheic animals. Bio Medical Central Microbiology. 10 (73): 112-119.
8- French, N.P., Midwinter, A., Holland, B., Collins-Emerson, J., Pattison, R., (2009): Molecular Epidemiology of Campylobacter jejuni Isolates from Wild-Bird Fecal Material in Children’s Playgrounds. Applied and Environmental Microbiology. 3 (75): 779-783.
9- Hughes, L.A., Bennett, M., Coffey, P., Elliott, J., Jones, T.R,. (2009): Molecular epidemiology and characterization of Campylobacter spp. isolated from wild bird populations in northern England. Applied and Environmental Microbiology. 10 (75): 3007-3015.
10-Kim, S., Lee, Y.M., Hwang, I.G., Kang, D.H., Woo, G.J., Rhee, M.S., (2009): Eight enrichment broths for the isolation of Campylobacter jejuni from inoculated suspensions and ground pork. Letters in Applied Microbiology. 5 (49): 620-626.
11-Klena, J.D., Parker, C.T., Knibb, K., Ibbitt, J.C., Devane, P.M., Horn, S.T., Miller, W.G., Konkel, M.E., (2004): Differentiation of Campylobacter coli, Campylobacter jejuni, Campylobacter lari, and Campylobacter upsaliensis by a multiplex PCR developed from the nucleotide sequence of the lipid A gene lpxA. Journal of Clinical Microbiology. 12 (42): 5549-5557.
12-Lastovica, A.J., Le, Roux, E., (2001): Eficient isolation of Campylobacter Upsaliensis from stool. Journal of clinical Microbiology. 11 (39): 4222-4223.
13-Linton, D., Lawson, A., Owen, R., Stanley, J,. (1997): PCR detection, identification to species level, and fingerprinting of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli direct from diarrheic samples. Journal of Clinical Microbiology. 10 (35): 2568-2572.
14-Moser, I., Rieksneuwöhner, B., Lentzsch,. (2001): Genomic Heterogeneity and O-Antigenic Diversity of Campylobacter upsaliensis and Campylobacter helveticus Strains Isolated from Dogs and Cats in Germany. Journal of Clinical Microbiology. 7 (39): 2548-2557.
15-Persson, S., Boer, R.F., Kooistra-Smid, A., Olsen, K.E,. (2011): Five commercial DNA extraction systems tested and compared on a stool sample collection. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 3(69): 240-244.
16-Rees, J.H., Soudain, S.E., Gregson, N.A., Richard, A.C., Hughes, M.D,. (1995): Campylobacter jejuni infection and Guillain-Barre syndrome. New England Journal of Medicine, 10 (333): 1374-1379.
17-Rosyidi, A., Budhiharta, S., Asmara, W., Yudhabuntara, D,. (2011): Phenotypic and Genotypic Detection of Campylobacter jejuni at Local Chicken and Chicken Meat. Animal Production. 2(12): 128-134.
18-Tresierra-Ayala, A., Bendayan, M.E., Bernuy, A., Espinoza, F., Fernandez, H,. (1995): Carriage of the classical thermotolerant Campylobacters in healthy domestic animals from eastern Peru. Revista do Instituto de MedicinaTropical de São Paulo. 6(37): 537-539.
19-Vandenberg, O., Skirrow, M.B., Butzler, J.P,. (2005): Campylobacter and Arcobacter. Topley and Wilson's Microbiology and Microbial Infections. 2(10): 1541-1553.
_||_