ارزیابی آنتی‌ژن‌های کیست هیداتیک در تشخیص هیداتیدوز به روش الایزای نقطهای
محورهای موضوعی : پژوهش های بالینی دام های بزرگ
کلید واژه: کیست هیداتیک, الایزای نقطهای, آنتی‌ژن,
چکیده مقاله :
الایزای نقطه ای یکی از روشهای تشخیص کیست هیداتیک است که حساسیت و ویژگی بالایی دارد. در این تحقیق، پنج آنتی ژن مختلف برای تشخیص کیست هیداتیک به روش الایزای نقطه ای با هم مقایسه شدند. این آنتی ژن ها، آنتی ژن هموژنیزه پرتواسکولکس (HPA) ، آنتی ژن دیواره داخلی کیست (HLA) و آنتی ژنهای مایع کیست شامل: آنتی ژن خام (CHFA)، آنتی ژن جوشانده (BAB) و آنتی ژن اتوکلاوه (AAB) بودند. برای انجام آزمون ابتدا آنتی ژن ها بر روی غشاء نیتروسلولز قرار داده شدند، سپس مرحله مسدود سازی با سرم آلبومین گاوی 3% به مدت یک ساعت انجام گرفت. پس از شستشو با فسفات بافر سالین، غشاء برای یک ساعت در آنتی بادی اولیه (سرم مشخص از نظر آلودگی) و بعد از شستشوی مجدد با PBS، در آنتی بادی ثانویه (آنتی‌بادی گونژوکه با پراکسیداز) قرار گرفت. برای قرائت نتایج که با رنگی شدن محل استقرار آنتی ژن مشخص می‌شد، از سوبسترای دی آمینو بنزیدین (DAB) استفاده گردید. نتایج بررسی حاضر نشان داد حساسیت و ویژگی آنتی ژن ها به ترتیب در مایع خام (8/54% و 1/39%)، در مایع جوشانده (8/54% و 5/56%)، در مایع اتوکلاو شده (2/45% و 4/67%)، در پروتواسکولکس (6/78% و 4/30%) و در دیواره (1/57% و 50%) می باشد. در این بررسی دو آنتی ژن هموژنیزه پروتواسکولکس و مایع اتوکلاو شده به ترتیب بالاترین حساسیت و ویژگی را نشان دادند. برای افزایش دقت در تشخیص هیداتیدوز بهتر است ابتدا نمونه های سرمی با یک آزمون با حساسیت بالا آزمایش شوند و سپس از آزمونی استفاده شود که دارای ویژگی بالاتری باشد.
Dot-ELISA is one of the diagnostic methods for hydatidosis that has high susceptibility and known factor. In the present study, five antigens were compared by dot-ELISA for diagnosing hydatid cyst. These antigens were homogenated protoscolex antigen (HPA), hydatid layer antigen (HLA) and antigens of fluid hydatid cyst: crude hydatid fluid antigen (CHFA), autoclaved antigen B (AAB) and boiled antigen B (BAB). TO examin every sample, first the antigens was set on the nitrocellulose membrane. Then, this membrane was placed in bovine albumin serum (BSA) %3 for blocking for an hour. After washing the membrane in PBS, it was placed in the first antibody (definite for infection) for an hour. After re-washing with PBS, it was placed in the second antibody that conjugated with peroxides. Then di-amino benzidine (DAB) substrate was used for reading the results that were recognized with color spots in places of antigens. The results show these antigens have different susceptibility and they are specific in dot-ELISA: CHFA (54.8% &39.1%), BAB (54.8% &56.5%), AAB (45.2% & 67.4%), HPA (78.6% &30.4%) and HLA (57.1% &50%). Protoscolex antigen has the highest susceptibility and AAB has the highest attributes. To increasing accuracy in hydatid diagnosis, it is better to test serum samples with a high susceptibility test and then a test may be applied with the higher susceptibility.
1- جالوسیان، ف (1379): راهاندازی و ارزیابی روش DIG-ELISA برای تشخیص سرولوژیک هیداتیدوزیس و مقایسه آن با روش Dot-ELISA. پایاننامه کارشناسی ارشد انگلشناسی پزشکی دانشگاه تربیت مدرس.
2- دلیمی اصل، ع(1378): راهاندازی و ارزیابی آزمایش الایزای نقطهای برای تشخیص هیداتیدوزیس انسانی. مجله دانشور 24: صفحه 42-37
3- Abdel-Hafez, S. K., Kamhawi, S. A., (1997): Cystic echinococcosis in the Levant countries (Jordan, Palestinian Autonomy, Israel, Syria and Lebanon). In F.L. Andersen, H. Ouhelli & M. Kachani. (eds.) Compendium on Cystic Echinococcosis in Africa and Middle Eastern Countries with Special Reference to Morocco. Provo, UT: Brigham Yound university: 292-316
4- Allan, J. C., Craig, P. S., (1989): Coproantigens in gut tape worm infection. Hymenolepis diminuta in rats. Parasitol. Res. 76: 68-73
Biava, M. F., DOA, A., Fortier, B., (2001): Laboratory Diagnosis of Cystic Hydatic Disease. World J. Surgery. 25, 1: 4-10
5- Carmena, D., Benito, A., Eraso, E., (2006): Antigens for the immunodiagnosis of Echinococcus granulosus infection: An update. Acta Trop, 98(1):74-86
6- Hadighi, R., Mirhadi, F., Rokni, M. B., (2003): Evaluation of a dot-ELISA for the
serodiagnosis of human hydatid disease. Pak. J. Med. Sci. 19, 4: 268-271
7- Kittelber, R., Reichel, M. P., Jenner, and J., (2002): Evaluation of three enzyme- linked immunosorbent assays (ELISA) for the detection of serum antibodies in sheep infected with Echinococcus granulosus. Vet. Parasitol. 110: 57-76
8- Lowry, O. H., Rosenbrough, N. J., Farr, A. I., Randall, R. J., (1951): Protein measurement with folin phenol reagent. J. Biolog. chem. 193: 265-275
9- Malgorzata, P., Stefaniak, J., (2001): Comparision of the dot immunobinding assay and two enzyme-linked immune sorbent assay kits for the diagnosis of liver cystic echinococcusis. Hepatol. Res. 21: 14-26
10- Mcvie, A., Ersfeld, K., Rogan, M. T., (1997): Expression and immunological charactrisation of Echinococcus granulosus recombinant antigen B for IgG4 subclass detection in human cystic echinococcosis. Acta. Trop. 67: 19-35
11- Moosa, R. A., Abdel-Hafez, S. K., (1994): Serodiagnosis and seroepidemiology of human unilocular hydatidosis in Jordan. Parasitol. Res. 80: 664-671
12- Njeruh, F. M., Gathuma, J. M., (1989): Diagnosis of human hydatid disease in surgically confirmed cases by the use of indirect haemagglutination test based on thermostable lipoprotein and on unfractionated hydatid cyst fluid. Ann. Trop. Med. Parasitol. 83: 229-303
13- Pappas, M. G., Schantz, P. M., Cannon, L. T.Sr., Wahlquist, S. P., (1986): Dot-ELISA for the rapid serodiagnosis of human hydatid disease. Diagn. Immunol. 4, 6: 271-6
14- Parija, S. C., (1998): A review of some sample immunoassays in the serodiagnosis of cystic hydatid disease. Acta. Trop. 70: 17-24
15- Rogan, M. T., Craig, P. S., Zeyhle, E., (1991): Evaluation a rapid of Dot-ELISA as a field test for the diagnosis of cystic hydatid disease. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 85: 773-777
16- Romia, S. A., Youssef, M. E., Handoussa, A. E., (1992): Dot-ELISA as a diagnostic test in hydatid disease. J. Egypt. Soc. Parasitol. 22: 603-610
17- Sbihi, Y., Rmigui, and A., (2000): Comparative sensitivity of six serological tests and diagnostic value of ELISA using purified andtigen in hydatisosis. J. Clin. Lab. Anal. 15: 14-18
18- Shuklal, N., Husain, N., Agarwal, G. G., Husain, M., (2008): Utility of cysticercus fasciolaris antigen in Dot ELISA for the diagnosis of neurocysticercosis. Indian J. Med. Sci. 62, 6: 222-227
19- Siavashi, M. R., taherkhani, H., Rezaei, K., (2005): Comparision of Dot-ELISA and sandwich ELISA Diagnosis tests in Detection of Human Hydatidosis. Iranian Biomed. J. 9: 91-94
20- Swarna, S. R., Parija, S. C., (2008): Dot-Elisa for evaluation of hydatid cyst wall, protoscoleces and hydatid cyst fluid antigens in the serodiagnosis of cystic echinococcosis. Revista do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo. 50(4):233-6
21- Wang, Y., Bradshaw, H., Rogan, M.T., Craig, P.S., (2002): Rapid dot-ELISA for the detection of specific antigens in the cyst fluid from human cases of cystic echinococcosis. Ann. Trop. Med. Parasitol. 96(7): 691-694
_||_