بررسی میزان فعالیت آنزیم های GOT, GPT ,LDHپلاسمای منی و ارتباط آن باکیفیت اسپرماتوزوئیدهای منجمد گاومیش
محورهای موضوعی : علوم بالینی دامپزشکیعبدالرضا رستگارنیا 1 , یحیی عیوض صحرا 2 , وحید شفیع پور 3
1 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه
2 - دانش آموختۀ دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه
3 - کارشناس مرکز پرورش واصلاح نژاد گاومیش ایستگاه جبل ارومیه
کلید واژه: منی منجمد, آنزیم های, LDH. GPT .GOTگاومیش,
چکیده مقاله :
هدف این تحقیق تعیین میزان فعالیت آنزیم های GOT. GPTو نیز LDHپلاسمای منی در طی فرایند عمل آوری و انجماد و ارتباط آن با کیفیتاسپرماتوزوئیدهای منجمد می باشد. برای این منظور تعداد 25انزال 5راس ازگاومیش های نر موجود در ایستگاه پرورش گاومیش شمالغرب کشور(ایستگاه جبل) جمع آوری گردید. نمونه های منی با کیفیت عالی و با داشتن بیش از 80درصد اسپرماتوزوئید با تحرک رو به جلو در دمای 37درجهسانتیگراد با رقیق کننده تریس رقیق گردید. پس از طی مرحله خنک شدن ( )coolingدر دمای 4درجه سانتیگراددر ظرف مدت 2ساعت و نیز اعمالزمان تعادل 4-6ساعت در دمای 4درجه سانتیگراد متعاقب افزودن گلیسرول، نمونه های رقیق شده در پایوت های 0.5میلی لیتری فرانسوی با اعمالزمان انجماد مشخص قبل از ورود در ازت مایع منجمد گردیده و در داخل کانتینرهای مخصوص ازت مایع نگهداری شدند. میزان فعالیت آنزیم هایمورد نظربلافاصله پس از جمع آوری منی ونیز در مورد نمونه پایوتهای منجمد پس از گذشت 72ساعت از زمان انجماد،متعاقب یخ گشایی ()thawingدر دمای 37درجه سانتیگراد به مدت 40ثانیه صورت گرفت. برای اندازه گیری فعالیت آنزیم LDHاز روش کنتیک اکسیداسیون لاکتات به پیرووات ونیز برای اندازه گیری فعالیت سایر آنزیم ها از روش کالریمتری استفاده گردید. در این راستا میزان تحرک، درصد اسپرماتوزوئیدهای با غشای پلاسمالمایسالم و یکپارچه و نیز آکروزومهای دست نخورده نمونههای منجمد مورد نظر پس از ذوب به ترتیب یا استفاده از میکروسکوپ صفحه گرم ( 37درجهسانتیگراد،) آزمایش HOSTو نیز رنگ آمیزی گیمسا مورد بررسی قرار گرفت میانگین فعالیت آنزیم های LDH. GPT. GOTپایوتهای منجمد گاومیشنر مورد بررسی به ترتیب ( 90/4±32/7 )IU/L( ،270/4±58/5 )IU/L( ،140/4±18/5 )IU/Lگزارش گردید. آنالیز نتایج بدست آمده در ارتباط با ارزیابیکیفیت نمونه های منی منجمد پس از یخ گشایی بر اساس میزان فعالیت آنزیم های LDH. GPT. GOTنشان داد که بین میزان تحرک ونیز درصداسپرماتوزوئیدهای زنده و با آکروزوم نرمال با میزان فعالیت آنزیم های مورد نظر ارتباط معکوس و معنی داری وجود دارد، بطوریکه با کاهش کیفیت منیمنجمد میزان فعالیت آنزیم های تحت آزمایش افزایش نشان می دهد ( .)P>0/05به طور کلی نتایج حاصل از این تحقیق نشان می دهد اندازه گیری میزانفعالیت آنزیم های پلاسمای منی میتواند به عنوان یک شاخص در ارزیابی کیفیت نمونه منی منجمد گاومیش مورد استفاده قرار گیرد
This study was conducted to evaluate seminal enzyme (GOT, GPT and LDH) profle and its relationship withquality of buffalo frozen spermatozoa. For this purpose ,twenty-fve split pooled ejaculates from fve buffalo bulbsin Buffalo Breeding and Training center (Jabal-Urmia) possessing more than 80% visual sperm motility , werediluted at 37◦C in tris- egg yolk extender. The diluted semen was cooled to 4◦C within 2 hours, equilibrated at 4◦Cfor 4-6 hours following the addition of glycerol , flled in 0.5 ml French straws and were subjected to coolingcondition before being plunged into liquid nitrogen . Semen was thawed at 37◦C for 40 seconds after 72 hours ofstorage inside liquid nitrogen. Post thaw visual sperm motility, plasma membrane integrity and acrosome morphology of each frozen semen sample were assessed by warm plate microscopy at 37◦C, hypo osmotic swellingtest, and Giemsa staining, respectively. LDH and GOT(AST) ،GPT(ALT) enzyme activities were measured usingkinetic oxidation of lactate to private method and colorimetric method , respectively. Overall mean activity offrozen semen GOT (AST) ،GPT (ALT) and LDH enzyme activities were 140.4±18.5 (IU/L), 270.4±58.5 (IU/L)and 90.4±32.7 (IU/L) ,respectively. The relationship between the activities of these enzymes and semen qualityshowed only a positive correlation between increased LDH and GOT (AST) ،GPT (ALT) enzyme activities anddecrease post thaw spermatozoa characteristics. These result revealed that seminal enzyme (GOT, GPT and LDH)profle in extender is suitable and recommendable for evaluation of buffalo frozen semen.