آنالیز فیلوژنتیک مایکوباکتریوم آویوم تحت‌گونه‌ پاراتوبرکلوزیس جدا شده از گاوداری‌های استان تهران

محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی

بهبود جعفری ¹ (دانش‌آموخته، گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.)
محمود جمشیدیان ² (استاد، گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.)
فرهاد موسی خانی ³ (استادیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی،کرج، ایران.)

تاریخ دریافت : 1393/07/21 تاریخ پذیرش : 1393/11/18 تاریخ انتشار : 1393/09/01

کلید واژه: تهران, مایکوباکتریوم آویوم تحت‌گونه‌ پاراتوبرکلوزیس, آنالیز فیلوژنتیک,

چکیده مقاله :

بیماری یون یا پاراتوبرکلوزیس نوعی التهاب روده شدید، مزمن و پیش رونده در نشخوارکنندگان با عامل مسبب مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکلوزیس می باشد که خسارات اقتصادی فراوانی به صنعت دامپروری به ویژه گاوداری های شیری وارد می کند. از سوی دیگر آن را عامل ایجاد کننده بیماری کرون در انسان می شناسند. این مطالعه با هدف آنالیز فیلوژنتیک مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس جداشده از گاوداری های استان تهران انجام گردید. در این مطالعه از تعداد 100 نمونه مدفوع گاوهای مشکوک به بیماری یون، استخراج DNAانجام شد سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن IS900واکنش Nested PCRصورت گرفت و از موارد مثبت جدا شده، 14 نمونه به طور تصادفی برای توالی یابی به شرکت ماکروژن کره ارسال گردید. در این مطالعه در مجموع 28 نمونه از 100 نمونه مدفوعی از نظر وجود باکتری مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکلوزیس مثبت بود. بعد از توالی یابی نمونه‌های مثبت ملاحظه گردید که بیش از 99 درصد با توالی های موجود در بانک ژن شباهت وجود دارد. همچنین نتایج مطالعه حاضر نشان داد که سویه های KJ629114 وAE016958 بیشترین شباهت و سویه CP000325 بیشترین تفاوت را با جدایه های حاصل از این مطالعه در ژن GyrAدارند. در مورد ژن GyrBنیز بیشترین شباهت مربوط به سویه های AE016985 ،CP005928 وCP009614 و بیشترین تفاوت هم مربوط به سویه GU143884می باشد. نتایج مطالعه نشان داد که تکنیک Nested PCRمی تواند روش ارزشمندی برای شناسایی مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکلوزیس در حیوانات باشد.

چکیده انگلیسی:

   Paratuberculosis or Johne's disease is a severe chronic and progressive intestinal inflammation in ruminants caused by Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis which can lead to great economic losses to the livestock industry especially dairy idustry. On the other hand, it is known as a zoonosis in the pathogenesis of Crohn's disease in humans. This study was conducted with the purpose of phylogenetic analysis of Mycobacterium avium par tuberculosis isolated from dairies in Tehran. In this study, DNA extraction was performed on 100 stool samples from Johne's disease infected cattle. Then using specific primers of gene IS900, Nested PCR reactions was carried out and from the positive samples isolated, 14 cases were randomly selected and sent to Macro gene Company in Korea for sequencing. In this study, 28 samples from a total of 100 stool samples were positive for MAP. After sequencing, more than 99% of the positive samples were similar with sequences in gene bank. The Results showed that Nested PCR technique can be a valuable test for detection of Mycobacterium avium paratuberculosis in animals. The sequencing results indicated that strains KJ629114 and AE016958 had the highest similarity and CP000325 had the highest difference in GyrA gene. In regard to GyrB gene, the highest similarity belongs to strains AE016985, CP005928 and CP009614 and the highest difference was related to GU143884.

منابع و مأخذ:

• حسنی طباطبایی، ع. و فیروزی، ر. (1380). بیماری‌های باکتریایی دام. انتشارات دانشگاه تهران، صفحه: 414.


• حق­خواه، م.، انصاری لاری، م.، نوین باهران، ا. و بهرامی، ا. (1387). تعیین میزان شیوع مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس بر روی نمونه‌های تانک شیر به­روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در استان فارس. شماره 88، صفحات: 13-8.


• دوستی، ع. و مشکلانی، س. (1388). تشخیص مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس به روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز آشیانه‌ای در گاوهای شیری مشکوک به بیماری یون. مجله دنیای میکروب‎ها، سال دوم، شماره 1، صفحات: 22-19.


• دیلمقانی، م.، یوسف بیگی، ق.، کاظم نیا،ع. و اسمعیل نژاد، ب. (1390). جداسازی MAP از گاوان منطقه ارومیه. مجله پژوهش و سازندگی ، شماره 93، صفحات: 17-13.


• سیدین، س.، تاجبخش، ح. و زهرایی صالحی، ت. (1389). شناسایی مایکوباکتریوم آویوم تحت­گونه پاراتوبرکلوزیس در نمونه‌های مدفوع گاوهای نژاد هلشتاین- فریزین با استفاده از روش‌های کشت و مولکولی. مجله تحقیقات دامپزشکی، دوره 65، شماره 2، صفحات: 140-135.


• شرافتی چالشتری، ر.، شاکریان، ا.، ممتاز، ح. و شرافتی چالشتری، ف. (1388). شناسایی میکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس به­روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در نمونه‌های شیر خام گاوهای شهرکرد. مجله علوم آزمایشگاهی، دوره3، شماره 1، صفحات: 20-15.


• نصیری، م.، جهاندار، م.، سلطانی، م.، مهدوی، م. و دوستی، م. (1391). شناسایی و تعیین سویه مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس به­روش PCR و REA بر اساس قطعات درون جای­گیر IS900  و IS1311. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره 4، شماره 1، صفحات: 96-83.
  
  
  
  • Alexander, D.C., Turenne, C.Y. and Behr, Ma. (2009). Insertion and deletion events that define the pathogen Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Journal of Bacteriology, 19(3): 1018-1025.
  
  
  • Beaudeau, F., Belliard, M., Joly, A. and Seegers, H. (2007). Reduction in milk yield associated with Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) infection in dairy Cows. Veterinary Research, 38(4): 625-634.
  
  
  • Berghaus, R.D., Lombard, J.E., Gardner, I.A. and Farver, T.B. (2005). Factor analysis of a Johne's disease risk assessment questionnaire with evaluation of factor scores and a subset of original questions as predictors of observed clinical paratuberculosis. Preventive Veterinary Medicine, 12: 291-309.
  
  
  • D' Haese, E., Dumon, I., werbrouck, H.J. and Heman, L. (2005). Improved detection of Mycobacterium paratuberculosis in milk. The Journal of Dairy Research, 72: 125-128.
  
  
  • De Meneghi, D., Nebbia, P., Robino, P. and zoppi, S. (2006).detection and excretion pattern of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis of milk of asymptomatic sheep and goats by nested-PCR. Small Ruminant Research, 6: 116-120.
  
  
  • Donaghy, J.A., Rowe, M.T., Rademaker, J.L., Hammer, P., Herman. L. and De Jomghe, V. (2008).  An inter-Laboratoty ring trial for the detection and isolation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from raw milk artificially contaminated with naturally infected faeces. Journal of Food Microbiology, 25(1): 128-135.
  
  
  • Douarre, P.E., Cashman, W., Buckley, J., Coffey, A. and O'Mahony, J.M. (2010). Isolation and detection of Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (MAP) from cattle in Ireland using both traditional culture and molecular based methods. Gut Pathogens, 2: 110.
  
  
  • Elena, C., Lucia, D.J., Lucas, D. and Alicia, A. (2012). Progress in molecular typing of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis; Research in Veterinary Science, 92: 169-179.
  
  
  • Eriks, I.S., Munck, K.T., Besser, T.E., Cator, G.H. and Kapur, V. (1996). Rapid differentiation of Mycobacterium avium and Mycobacterium paratuberculosis by PCR and restriction enzyme analysis. Journal of Clinical Microbiology, 34: 734-737.
  
  
  • Franck, B., Iker, A.S., Thierry, C., Joseba, M., Ramón, A. and Karen, S. (2012). Inter- and Intra-subtype genotypic differences that differentiate Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strains. Biet et al., BMC Microbiology, 12: 1471-2180.
  
  
  • Jagdeep, S.A., Neelam, S., Krishnamoorthy, N., Vani, B., Shoorvir, S. and Swati, S. (2009). Genomic analysis of local isolate of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis. Veterinary Microbiology, 134: 375-382.
  
  
  • James, W., Torsten, S., Dieter, M., Josef, W. and Wojtek, P. (2011). Exploring the zoonotic potential of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis through comparative genomics. PLoS ONE, www.plosone.org. 6(7): 221-171.
  
  
  • John, P. (2012). Genome sequencing of ovine isolates of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis offers insights into host association. Bannantine et al., BMC Genomics, 13(89): 1471-2164.
  
  
  • Jorgensen, J.B. and Jensen, P.T. (1978). Enzyme–linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibody-ies to Mycobacterium paratuberculosis in cattle. Acta Veterinaria Scandinavica, 19: 310-312.
  
  
  • O'Mahony, J. and Hill, C. (2004). Rapid real-time PCR assay for detection and quantitation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis DNA in artificially contaminated milk. Applied and Environmental Microbiology, 70: 4561-4568.
  
  
  • Quinn, P.J. (2002). Veterinary Microbiology and Microbial Disease.  1st ed., USA: Blackwell Science Company, pp: 97-105.
  
  
  • Stable, J., Wells, S. and Wagner, B. (2002). Relationships between fecal culture, ELISA, and bulktank milk test results for John's disease in us dairy herds. Journal of Dairy Science, 85: 525-533.
  
  
  • Singh, S.V. (2007). Evaluation of highly sensitive indigenous milk ELISA kit with fecal culture, milk culture and fecal- PCR for the diagnosis of bovine Johne’s disease (BJD) in India. Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases, 30(3): 175-186.
  
  
  • Slana, I., Kralik, P., Karalova, A. and Pavlik, I. (2008). On-farm spread of Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis in raw milk studied by IS900 and F57 competitive real time quantitative PCR and culture examination. International Journal of Food Microbiology, 128: 250-257.
  
  
  • Vary, P.H., Andersen, P.R., Green, E., Hermon-Taylor, J. and Mc Fadden, J.J. (1990).   Use of highly specific DNA probe and the polymerase chain reaction to detect Mycobacterium paratuberculosis in Jone's disease. Journal of Clinical Microbiology, 28: 933-937.
  
  
  • Vasnick, E., Vercammen, F., Bauwens, L., D'Haese, E., Nelis, H. and Geysen, D. (2005). A survey for Mycobacterium avium subspecies partuberculosis in the Royal zoological society of Abtwerp. Veterinary Journal, 170: 249-256.
  
  
  • Verlaine, J., Michelle, M., Gehringer,  M., Mitchell, G. and Brett, A.  (2011). How accurately can we detect Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis infection? Journal of Microbiological Methods, 85: 1-8.
  
  
  • Wells, S.J. (2006). Evaluation of a rapid fecal PCR test for detection of Mycobacterium avium subsp paratuberculosis in dairy cattle.  Clinical and Vaccine Immunology. 13(10): 123-125.