بررسی اثر اینوزیتـول در جدا شدن قطره پروتوپلاسمی و الگوی حرکتی اسپرم دم اپیدیدیم گاومیش رودخانه‌ای

محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی

امیرعلی کاوه ¹ , پرویز تاجیک ² , حمید قاسم‌زاده نوا ³ , کیوان عبدی ⁴ , پژمان میرشکرایی ⁵

1 - رزیدنت مامائی و بیماری‌های تولیدمثل دامپزشکی، دانشکده علوم تخصّصی دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران
2 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
3 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
4 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه، ارومیه، ایران
5 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران

تاریخ دریافت : 1387/08/08 تاریخ پذیرش : 1387/10/30 تاریخ انتشار : 1387/06/01

کلید واژه: اسپرم, قطره پروتوپلاسمی, اینوزیتول, گاومیش رودخانه‌ای,

چکیده مقاله :

هدف از این مطالعه بررسی اثر اینوزیتول با غلظت 1 نرمال بر جدا شدن قطره پروتوپلاسمی و الگوی حرکتی اسپرم‌های دم اپیدیدیم گاومیش رودخانه‌ای می‌باشد. بدین منظور، با مراجعه به کشتارگاه صنعتی ارومیه، از ماه فروردین تا ماه شهریور 1386، 50 جفت بیضه از گاومیش‌های نر بالغ بلافاصله بعد از کشتار جمع‌آوری و در مجاورت یخ 4 درجه سانتی‌گراد در عرض نیم ساعت به آزمایشگاه منتقل گردید. سپس اسپرم‌های ناحیه دم اپیدیدیم با چند برش در ناحیه فاقد رگ‌های خونی جمع‌آوری و به محیط Hams F10 با pH نرمال اسپرم (7/6 الی4/7) در انکوباتور Co2 و به‌همراه 10% سرم جنین گاو منتقل و پس از 15 دقیقه انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتی‌گراد، اینوزیتول با غلظت 1 نرمال به اپندورف‌های حاوی اسپرم اضافه گردید. سپس در دقایق 15، 30، 45، 60، 90، 120، 180، 240 و360 از نمونه‌های فوق لام‌هایی با رنگ‌آمیزی ائوزین- نیگروزین تهیّه و هم‌زمان با نرم‌افزارCASA جهت ارزیابی الگوهای حرکتی بررسی گردید. لام‌های رنگ‌آمیزی شده از نظر تعداد اسپرم‌های زنده و مرده و اسپرم‌های دارای قطره و فاقد قطره پروتوپلاسمی پروگزیمال و دیستال شمارش گردید. داده‌های به‌دست آمده از نرم افزار CASA با آزمون تی (t-Test) آنالیز گردید. نتایج نشان داد که اینوزیتول 1 نرمال تاثیر معنی‌دار در الگوهای حرکتی اسپرم‌ها نداشته امّا در زمان‌های 30، 120، 180 و 240 باعث افزایش معنی‌دار (05/0>p) در تعداد اسپرم‌های زنده فاقد قطره پروتوپلاسمی می‌گردد.

چکیده انگلیسی:

     The purpose of this study is to determine the effects of 1Normal concentration of Inositol solution on the protoplasmic droplet detachment and motility patterns of epididymal tail sperms in the water Buffalo. Thus, 50 pairs of adult male water buffalo testicles were collected immediately alter slaughter during March to September 2007 from urmia abattoir and transported to the laboratory alongside 4ºC ice pack in 30 minutes. Epididymal tail sperms were collected by incising the hypo vascularized areas and transported to Hams F10 culture media with normal sperm pH (6.7-7.4) and containing 10% embryonic cell serum and following 15 minutes of incubation at 37oC inside the Co2 incubator, 1N solution Inositol was added to sperm containing microtubes. Eosin-nigrosin stained sperms were then prepared from the above mentioned samples at 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240 and 360 minutes and the motility patterns were investigated using the CASA software. The number of live and dead sperms and sperms with or without the proximal and distal protoplasmic droplets were counted in the stained sperms. The results obtained from the CASA software were analyzed using t-Test. The results indicated that 1N Inositol had no significant effect on sperm motility patterns but had significantly (p<0.05) increased the number of live sperms without the protoplasmic droplet at times 30, 120, 180 and 240.

منابع و مأخذ:

1. آرتور، ج. (1379) : تولید مثل و مامایی دامپزشکی (تالیف)، ترجمه: علوی شوشتری، م. انتشارات دانشگاه ارومیه، صفحات: 129-126.


2. ای.اس.ای حافظ بی. حافظ(1382): تولیدمثل در حیوانات مزرعه‌ای (تالیف)، ترجمه: محمودزاده، ع. انتشارات دانشگاه گیلان، صفحات: 231-224.


3. زمییانیس، ر. (1382): تکنیک‌های تشخیصی و درمانی در تولیدمثل (تالیف)، ترجمه: هورشتی پ. و بلورچی، م. انتشارات نوربخش، صفحات: 49-47.


4. Aitken, R.J., Sutton, M., Warner, P. and Richardson, D.W. (1985): Relationship between the movement characteristics of human spermatozoa and their ability to penetrate cervical mucus and zona-free hamster oocytes. J. Reprod. Fertil., 73,441–449.


5. Akbarsha, P., Latha, N.L. and Murugaian, P. (2000): Retention of cytoplasmic droplet by rat caudal epididymal spermatozoa after treatment with cytotoxic and xenobiotic agents., Journal of Reproduction and Fertility, 120: 385–390.


6. Amann, R.P., Seidel, G.E. and Mortimer, R.G. (2000): Fertilizing potential in vitro of semen from young beef bulls containing a high or low percentage of sperm with a proximal droplet. Theriogenology, 54: 1499-515.


7. Auger, J., Leonce, S., Jouannet, P. and Ronot, X. (1993): Flow cytometric sorting of living, highly motile human spermatozoa based on evaluation of their mitochondrial activity. J. Histochem. Cytochem., 41: 1247- 1251.


8. Breitbart, H. and Nass-Arden, L. (1995): Relationship between intracellular calcium, energy metabolism and motility of ram sperm. Arch. Androl., 35: 83-92.


9. Chan, S.Y., Tsoi, W.L., Leung, J., Ng, V., Lo, T. and Wang, C. (1990): The accuracy of sperm concentration determination by the automated cell soft semen analyzer before and after discontinuous Percoll gradient centrifugation. Andrologia, 22:55-61.


10. Cooper, T.G. (2005): Cytoplasmic droplets: the good, the bad or just confusing? Human Reproduction, 20(1): 9-10.


11. Cox. J.F., Alfaro,V. Montenegro,V. and Rodriguez-Martinez, H. (2006): Computer-assisted analysis of sperm motion in goats and its relationship with sperm migration in cervical mucus. Theriogenology, 66: 860–867.


12. Donnelly, E.T., Lewis, S.E., McNally, J.A. and Thompson, W. (1998): In vitro fertilization and pregnancy rates: the influence of sperm motility and morphology in IVF outcome. Fertil. Steril., 70: 305–314.


13. Farrell, P.B., Presicce, G.G., Brockett, C. and Foote, R.H. (1998): Quantification of bull sperm characteristics measured by computer-assisted sperm analysis (CASA) and the relationship to fertility. Theriogenology, 49: 871–879.


14. Grunert, J.H., De Geyter, C., Bordt, J., Schneider, H.P.G. and Nieshlag, E.  (1989): Does Computerized image analysis of sperm movement enhance the predictive value of semen analysis for in vitro fertilization results?  International Journal of Andrology, 12: 329-338.


15. Hinting, A., Comhaire, F., Vermeulen, L., Dhont, M., Vermeulen, A. and Vandekerckhove, D. (1989): Value of sperm characteristics and the results of in vitro fertilization for predicting the outcome of assisted reproduction. Journal of Andrology, 13: 59-66.


16. Holt, C., Holt, W.V., Moore, H.D.M., Reed, H.C.B. and Curnock, R.M. (1997): Objectively measured boar sperm motility measurements correlate with the outcomes of on-farm inseminations: Results of two fertility trials. Journal of Andrology, 18(3): 312-323.


17. Holt, W., Watson, P., Curry, M. and Holt, C.  (1994): Reproducibility of computer-aided semen analysis: Comparison of five different systems used in a practical workshop.  Fertility and Sterility, 62: 1277-1282.


18. Janulis, L., Hess, R.A., Bunick, D., Nitta, H., Janssen, S., Asawa, Y. and Bahr J.M. (1996): Mouse epididymal sperm contain active P450 aromatase, which decreases as sperm traverse the epididymis. Journal of Andrology, 17: 111–116.


19. Kaabi, M., Paz, P., Alvarez, M., Anel, E., Boixo, J.C., Rouissi, H., Herraez , P. and Anal, L. (2003): Effect of epididimis handling conditions on the quality of  ram spermatozoa recovered post-mortem. Theriogenology, 60: 1249-1259.


20. Kathiravan, P. (2007): Computer automated motion analysis of crossbred bull spermatozoa and its relationship with in vitro fertility in zona-free hamster oocytes, Anim. Reprod. Sci., 19: 174-183.


21. Kato, S., Toshitaka S.A., Hdiroshi, H. and Yasuyuki, K. (1996): Timing of shedding and disintegration of cytoplasmic droplets from boar and development, 42: 237-241.


22. Kvist, U., Givercman, A., Haugan, T.B., Suominen, J. and Bjorndahl, L. (2002): Manual on Basic Semen Analysis Nordic Association for Andrology and Special Interest Group on Andrology.


23. Lauram, K., Deniser, H. and Annm, D. (2000): Correlation of CASA velocity and linearity parameters with sperm mobility phenotype in turkeys. Journal of Andrology, 21: 65-71.


24. Leidl, W., Kato, H., Hollerrieder, J. and Braun, J.  (1993): Analysis of sperm motility by computer assisted methods, with special consideration of in vitro fertilization.  Molecular Reproduction and Development, 36: 222-228.  


25. Liu, D.Y., Clarke, G.N. and Baker, H.W.G.  (1991):  Relationship between sperm motility assessed with the Hamilton-Thorn Motility Analyzer and fertilization rates in vitro. Journal of Andrology, 12: 231-239.


26. Moore, H.D.M. and Akhondi, M.A. (1996): Fertilizing Capacity of Rat Spermatozoa is correlated with decline in straight-line velocity measured by continuous computer-aided sperm analysis: Epididymal rat Spermatozoa from the proximal cauda have a greater fertilizing capacity in vitro than those from the distal Cauda or vas deferens. Journal of Andrology, 17: 50-60.


27. Mortimer, S.T., Schoe¨vae¨rt, D., Swan, M.A. and Mortimerm, D. (1997): Quantitative observations of flagellar motility of capacitating human spermatozoa. Hum. Reprod., 12: 1006–1012.


28. Saling, P.M. Sperm maturation. In: Bavister, B., Cummins, J. and Rolan, E.R.S. (1990): Fertilization in mammals. Sereno symposia, USA, Norwel, Massachusetts, pp: 49.


29. Setchell, B.P. and Brooks, D.E. Anatomy, vasculature, innervations and fluids of the male reproductive tract. In: Knobil, E. and Neill, J. (1988): The Physiology of Reproduction. New York: Raven Press, 1: 753–836.


30. Sukcharoen, N., Sithipravej, T., Promviengchai, S., Chinpilas, V. and Boonkasemsanti, W. (1998): Sperm morphology evaluated by computer (IVOS) cannot predict the fertilization rate in vitro after intracytoplasmic sperm injection. Fertil. Steril., 69: 564-568.


31. Thundathil, A.T., Palasz, A.D., Barth, R.J. and Mapletoft, B. (2001): The use of in vitro fertilization techniques to investigate the fertilizing ability of bovine sperm with proximal cytoplasmic droplets. Animal Reproduction Science, 65: 181–192.


32. Wainer, R., Merlet, F., Bailly, M., Lombroso, R., Camus, E. and Bisson, J.P. (1996): Prognostic sperm factors in intra-uterine insemination with partner’s sperm. Contraception, Fertility, Sexuality, 24: 897-903.


33. Youngquist, S. and Threlfall, R. (2007): Current Therapy in Large Animal Theriogenology, Saunders, London, pp: 221-237.