مطالعه اثرات پاتولوژیک آلودگی با قارچ کاندیدا آلبیکنس (Candida albicans) در هم‌کشتی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی با سلول¬های سرتولی گوسفند
محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی
امیرعلی شهبازفر
1
,
رضا اسد پور
2
,
مهداد تیر انداز
3
,
فرزاد کتیرایی
4
1 - دانشیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران.
2 - دانشیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران.
3 - دانش‌آموخته دکترای عمومی دامپزشکی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران.
4 - دانشیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران.
کلید واژه: سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی, سلول‌های سرتولی¬, سیتوپاتی, کاندیدا آلبیکنس.,
چکیده مقاله :
کاندیدا آلبیکنس (Candida albicans) عامل کاندیدیاز گوسفند، می‌تواند با ایجاد التهاب بیضه و التهاب اپیدیدیم در روند طبیعی قدرت باروری قوچ‌ها اختلال ایجاد کند. سلول‌های اسپرماتوگونی بیضه در طول حیات مرتباً تقسیم شده و با تولید اسپرماتوزوئیدها قدرت باروری جنس نر را حفظ می‌کنند. آسیب‌های وارد شده به بافت بیضه با تحت تأثیر قرار دادن سلول‌های بنیادی، باروری جنس نر را متأثر می‌سازند. در مطالعه حاضر، جداسازی، خالص‌سازی و کشت سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی بیضهء گوسفند به همراه سلول‌های سرتولی، در محیط کشتDMEM-F12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12) انجام گرفت. ماهیت سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی و سرتولی توسط تکنیک ایمینوسیتوشیمی تایید شد. سپس سلول‌ها با قارچ کاندیدا آلبیکنس در 5 گروه با دزهای متفاوت قارچی آلوده شدند و یک گروه نیز به عنوان گروه شاهد در نظر گرفته شد و هیچ قارچی به آن اضافه نشد. بعد از رشد قارچ‌ها در مدت 24 ساعت، سلول‌ها به همراه قارچ‌های رشد کرده توسط متانول فیکس شده و با رنگ هماتوکسیلین- ائوزین رنگ‌آمیزی شدند. اثر سیتوپاتیک قارچ کاندیداآلبیکنس از طریق بررسی‌های ریخت‌شناسی و اندازه‌گیری شاخص‌های آسیب سلولی شامل لاکتات دهیدروژناز و مالوندی‌آلدئید بعد از طی مدت 24 ساعت مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که کاندیدا آلبیکنس روی سلول‌های سرتولی و سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی در طی مدت 24 ساعت اثر سیتوپاتیکی را با وارد نمودن آسیب سلولی و رشد سریع در محیط، ایجاد می‌کند و میزان آسیب سلولی و شاخص‌های آسیب سلولی با افزایش دوز قارچ در گروه‌های مختلف، افزایش مييابد. به همین دلیل باید در نظر داشت تاحد ممکن از رشد قارچ در محیطهای کشت جلوگیری شده و از تحقیقات روی محیطهای کشت قارچزده اکیداً خودداری گردد.
Candida albicans is the cause of candidiasis in sheep .Candida albicans can cause fertility disorder in ram with epididymitis and orchitis. Spermatogonia keep proliferating during sexual life of male animals and maintain male fertility by producing spermatozoa. Testicular tissue damage affects germ cells and consequently influences male fertility. In the present study, we isolated and purified and then co-cultured spermatogonial stem cells with sertoli cells in DMEM-F12 culture media. Spermatogonia stem cells and sertoli cells were identified by vimentin and Oct-4 immunocytochemical staining method, respectively. The cells were infected with Candida albicans in five groups with different doses and one group was considered as control without fungal infection. After fungal growth within 24 hours, the cells and fungus were fixed with methanol and stained with hematoxylin and eosin. The cytopathic effects of Candida albicans were evaluated by morphological changes and cell injury biomarkers (LDH and MDA measurement) after 24 hours. The results indicated that Candida albicans had cytopathic effect on spermatogonia stem cells and sertoli cells during 24 hours infection. Candida exerts its damages by its cytopathic effects and its rapid growth in culture, and these damages were dose dependent. Therefore, fungus infection of culture media should be prevented and research on infected culture media should be strictly avoided.