کشت معلق نئوسپورا کنینوم با استفاده از لنفوسیت ترانسفورم شده با تیلریا لستوکاردی
محورهای موضوعی : میکروب شناسی کاربردی
شمسی اژدهاکش پور
1
(دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروبیولوژی)
محمد مهدی نام آوری
2
(موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شیراز، گروه باکتری شناسی)
ناهید نقشگر
3
(دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروبیولوژی)
عبدالله رحیمیان
4
(موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شیراز، گروه باکتری شناسی)
مریم منصوریان
5
(موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شیراز، گروه باکتری شناسی)
معصومه حیاتی
6
(موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شیراز، گروه باکتری شناسی)
کلید واژه: نئوسپورا کنینوم, رده سلولی عفونی با تیلریا لستوکاردی, کشت سلولی معلق, رنگ سنجیMTT,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: نئوسپورا کنینوم یکی از مهم‌ترین عوامل ایجاد کننده سقط جنین گاو در جهان به شمار می‌رود. تولید انبوه این تک یاخته در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از کشت سلولی و رده‌های سلولی مختلف انجام می‌گردد. از طرفی استفاده از رده‌های سلولی معلق در تولید انبوه فرآورده‌های بیولوژیک بسیار مقرون به صرفه است. هدف از این مطالعه بررسی امکان کشت تک یاخته نئوسپورا کنینوم با استفاده از رده سلولی معلق Ka6 می‌باشد. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت تجربی پس از کشت تاکی‌زوئیت نئوسپورا کنینوم بر روی رده سلولی Ka6 انجام شد. سپس توانایی این رده سلولی با رده سلولیVero که در حال حاضر بهترین رده سلولی برای کشت نئوسپورا است با روش رنگ سنجیMTT مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: نتایج این پژوهش نشان داد که تاکی‌زوئیت‌های نئوسپورا کانینوم به خوبی درون سلول‌های Ka6 وارد، تکثیر و از این سلول‌ها خارج شده‌اند. همچنین تکثیر تاکی‌زوئیت‌های این تک یاخته در هر دو رده سلولی Ka6 و Vero نسبت به گروه کنترل معنی دار بود. اما میزان تکثیر نئوسپورا بر روی رده سلولیKa6 تفاوت معنی داری نسبت به رده سلولیVero نداشت. نتیجه گیری: این مطالعه اولین گزارش موفق آمیز کشت تک یاخته نئوسپورا کنینوم با استفاده از رده سلولی معلق می‌باشد. از آن‌جایی که رده سلولیKa6 یک لنفوسیت ترانسفورم شده است و به دلیل امکان کشت آن به صورت معلق در سطح انبوه در بیوراکتور، استفاده از آن نسبت به رده سلولیVero ارجحیت دارد.
Background and Objectives: Neospora caninum is one of main etiologic factors of abortion in in cattle. The mass production of protozoa in laboratory conditions is performed based on growing in different cell lines. Since using suspension cell lines are very cost effective for mass production of biological products, this study aimed to evaluate the suspension cell culturing for production of this protozoan. Materials and Methods: This study was experimentally performed bases on growth of N. caninum tachyzoites on Ka6 cell line (a cell line obtained from cattle infected with Theileria lestoquardi, Razi Institute, Shiraz, Iran. Next, based on MTT assay, ability of this cell culture for production of N. caninum was compared with Vero cell as the best current cell line for this purpose. Results: The results showed that N. caninum tachyzoites could enter into K6a cell lines and after replication released from the cells successfully. Replication of the tachyzoites was significant in both Vero and K6a cell lines in compare to the control. Conclusion: To our knowledge, this is the first and successful report of suspension culture of N. caninum tachyzoites. Although, the rate of N. caninum proliferation on Ka6 cell line did not show any significant difference in compare to Vero cell line, since Ka6 cell line is a transformed lymphocytic cell and it is possible to grow massively this cell line as suspension bioreactors, it is preferred to Vero cell line.
1. Anderson M.L, Andrivo, AG, Conard PA. Neosporosis in cattle. Anim Reprod Sci. 2000; 60-61: 417-431.
2. Dubey JP. Neosporosis in cattle. J Parasitol. 2003; 89: 42-56.
3. Dubey JP. Review of Neospora caninum and Neosporosis in animal. Korean J Parasitol. 2003; 41(1): 1-16.
4. Bartley PM, Wright SE, Maley SW, Buxton D, Nath M, Innes EA. The development of immune responses in Balb⁄c mice following inoculation with attenuated or virulent Neospora caninum tachyzoites. Parasite Immunol. 2009; 31(7): 392-401.
5. VonlaufenV, GuetgN, NaguleswaranA, MüllerN, BjörkmanC, ScharesG, BlumroederDV, EllisJ, Hemphill A. In Vitro Induction of Neospora caninum bradyzoites in vero cells reveals differential antigen expression, localization, and host-cell recognition of tachyzoites and bradyzoites. Infect Immun. 2004; 72 (1): 576-583.
6. Hemphill A, Gottstein B. A European perspective on Neospora caninum. Int J Parasitol. 2000; 30(8): 877-924.
7. De Meerschaman F, Rettigner C, Focant C, Boreux R, Pinset C, Leclipteux, T, Losson B. Use of a serum-free medium to produce in vitro Neospora caninum and Toxoplasma gondii tachyzoites on Vero cells. Vet Res. 2002; 33(2): 159–168.
8. Freimoser FM, Jakob CA, Aebi M, Tuor U. The MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay is a fast and reliable method for colorimetric determination of fungal cell densities. Appl Environ Microbiol. 1999; 65(8): 3727-3729.
9. Saravanan BC, Sreekumar C, Bansal GC, Ray D, Rao JR, Mishra AK. A rapid MTT colorimetric assay to assess the proliferative index of two Indian strains of Theileria annulata. Vet Parasitol. 2003; 113(3-4): 211-216.