جداسازی آنتی ژن کپسولی باکتری سالمونلا تایفی Ty2 و تست حیوانی آن به منظور تهیه واکسن

محورهای موضوعی : میکروب شناسی مولکولی

مجید مقبلی ¹ , علی اکبر شعبانی ² , الهه اکبری فر ³

1 - گروه میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان
2 - گروه میکروبیولوژی دانشگاه علوم پزشکی سمنان
3 - گروه میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد قم

تاریخ دریافت : 1389/01/25 تاریخ پذیرش : 1388/02/25 تاریخ انتشار : 1388/01/12

کلید واژه: سالمونلا تایفی Ty2, آنتی ژن Vi, واکسن,

چکیده مقاله :

سابقه وهدف: بیماری تیفوئید یا حصبه گسترش جهانی دارد و شایع ترین عامل آن سالمونلا تایفی می باشد. ایجاد سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک ها درمان را پیچیده کرده و این بیماری را به عنوان یک تهدید برای اپیدمی های آینده مطرح نموده است. واکسیناسیون یکی از راهبردهای اساسی مقابله با این بیماری محسوب می شود. هدف از این پژوهش جداسازی آنتی ژن کپسولی (Vi) باکتری سالمونلا تایفی، و ارزیابی ایمنی زایی آن در مدل حیوانی می باشد. مواد وروش ها: در این مطالعه پس از کشت سویه سالمونلا تایفی Ty2 در محیط مولرهینتون آگار، سوسپانسیون سلولی در سرم فیزیولوژی تهیه و کپسول پلی ساکاریدی توسط رسوب گیری با حلال آلی ستاولون استخراج گردید. میزان اسید نوﮐﻠﺌیک موجود در نمونه با کدورت سنجی در طول موج nm 260 و میزان پروﺗﺌین با روش SDS-PAGEو برادفورد بررسی گردید. سپس از روش ایمونودیفیوژن برای بررسی صحت آنتی ژن Viجدا شده استفاده شد. درنهایت ایمنی زایی آنتی ژن Vi بر روی موش بررسی گردید. یافته ها: میزان اسید نوﮐﻠﺌیک و پروﺗﺌین در نمونه جدا شده به ترتیب µg/ml 08/0 و gµ 59/2 بود. درSDS-PAGE ، باند حاصل از نمونه جدا شده کاملاً مشابه با نمونه استاندارد بود. ایجاد خط رسوبی درایمونودیفیوژن وجود آنتی ژنVi را تأیید کرد. در بررسی آنتی ژن Vi جدا شده بر روی موش، 80% مصونیت ایجاد شد. همچنین تزریق به خرگوش نشان داد که میزان لیپوپلی‌ساکارید (LPS ) موجود در نمونه در حد ایجاد تب نیست. نتیجه گیری: با توجه به اینکه واکسن انسانی حصبه درحال حاضردر ایران تولید نمی شود، از این روش می توان به منظور جدا سازی آنتی ژن Vi استفاده نمود و آن را به‌عنوان یک کاندید واکسن انسانی معرفی کرد.

چکیده انگلیسی:

Background and objective: Typhoid is a worldwide disease. Salmonella Typhi is the most common agent causing typhoid. It is difficult to treat typhoid due to antibiotics multiple resistance and the bacterium is menace for future epidemic. Vaccination is the most successful method against this diseases. The aim of this study is isolation of Vi antigen from Salmonella Typhi Ty2 and evaluation of it immunogenicity in animal model. Material and methods: In this research, Salmonella Typhi Ty2 was cultured in Muller Hinton Agar Medium. After harvesting the cells and to suspention them into physiologic serum, polysaccharide capsule was extracted by precipitation with cetavlone. A mount of Nucleic acid in the sample were tested with Spectrophotometere at 260 nm and amount of protein were investigated with Bradford method and SDS-PAGE and the Immunodiffusion method were used to study of isolated Vi antigen. In final, immunogenesity of Vi antigen was tested in mouse. Result: Amount of Nucleic acid and protein in the isolated sample were  0.08 µg/ml and 2.59µg respectively. In the SDS-PAGE, smear band of the Standard Vi was similar to isolated sample completely. The precipitation band in the Immunodiffusion method was confirmed to presence Vi antigen. In the study of Vi antigen on the mouse, 80 percent immunity was been created. Also injection in Rabbit showed that LPS level in the sample is not cause much fever. Conclusion: With regard to non producing the Human Vaccine of Typhoid in Iran, to be able use of this method for isolation of Vi antigen and introduce it as a vaccine candidate.