بررسی تاثیر مهاری پروبیوتیک مهندسی شده لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس بر رشد سالمونلا انتریتیدیس

محورهای موضوعی : آلودگی میکروبی مواد غذائی

مطهره اسکندری ¹ , عباس دوستی ²

1 - دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
2 - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران

تاریخ دریافت : 1401/04/10 تاریخ پذیرش : 1402/07/27 تاریخ انتشار : 1402/07/01

کلید واژه: لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس, سالمونلا, Tachyplesin I,

چکیده مقاله :

ﭘﺮوﺑﻴوتیک‌ها اﺟﺰ‌ای ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻣﻴﻜﺮوﺑﻲ زﻧﺪه‌ای ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ وﻗﺘﻲ وارد دﺳﺘﮕﺎه ﮔﻮارش می‌شوند یک یا چند اثر مفید را روی سلامتی میزبان می‌گذارند. هدف از این تحقیق تولید و بررسی اثرات باکتری پروبیوتیک لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس (ATCC 4356) بیان کننده پپتید Tachyplesin I خرچنگ نعل اسبی بر رشد باکتری سالمونلا انتریتیدیس (ATCC 13311) است. پلاسمید نوترکیب pNZ8148- Tachyplesin I به روش شوک حرارتی وارد باکتری E.coli شد و سپس تخلیص شد‌. در مرحله بعد وکتور نوترکیب حاوی ژن Tachyplesin I به روش الکتروپوریشن وارد باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس شد و غربالگری توسط آنتی‌بیوتیک کلرامفنیکل و PCR انجام گرفت. سپس تاثیر مهاری باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس مهندسی شده بر روی رشد سالمونلا بررسی و با دیسک‌های آنتی بیوتیکی مقایسه گردید. ورود پلاسمید pNZ8148-Tachyplesin I درون باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس به کمک آنتی بیوتیک و واکنش PCR تایید شد. سپس لاکتوباسیلوس مهندسی شده تاثیر مهاری بر روی رشد باکتری سالمونلا را نشان داد، به صورتی‌که قطر هاله عدم رشد ایجاد شده بر روی سالمونلا تحت تاثیر لاکتوباسیلوس مهندسی شده قابل قبول بود. پس از مقایسه قطر هاله‌های دیسک‌های آنتی‌بیوتیکی آمپیسیلین، کلرامفنیکل و تتراسایکلین با لاکتوباسیلوس مهندسی شده و انجام آنالیز آماری، بین لاکتوباسیلوس دستکاری نشده (کنترل) و لاکتوباسیلوس بیان کننده ژن Tachyplesin تفاوت معنی دار در هاله عدم رشد دیده شد.با توجه به این که حضور ژنI Tachyplesin درون لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس تایید شد، هاله عدم رشد حاصل از آن در اطراف سالمونلا نشان دهنده این مطلب است که بیان و ترشح ژن Tachyplesin I درون لاکتوباسیلوس اثری مشابه آنتی-بیوتیک بر سالمونلا دارد.

چکیده انگلیسی:

Probiotics are living cellular components that have beneficial effects on the host in a certain number when they enter the gastrointestinal tract. The aim of this study was to produce and evaluate the effects of the probiotic bacterium Lactobacillus acidophilus, which expresses the peach's peptide Tachyplesin I, on the growth of Salmonella. The recombinant plasmid pNZ8148- Tachyplesin containing the Tachyplesin gene was introduced into E. coli by heat shock and then purified. The recombinant vector containing the tachiplicin gene was then inserted into Lactobacillus acidophilus by electroporation method and screened by chloramphenicol antibiotic and PCR. Then, the inhibitory effect of engineered Lactobacillus acidophilus on the growth of Salmonella was investigated and compared with antibiotic discs..After confirmation of the entry of plasmid pNZ8148-Tachyplesin into Lactobacillus acidophilus, it had an inhibitory effect on the growth of Salmonella pathogenic bacterium as the diameter of the growth inhibition zone created on Salmonella was acceptable under the influence of engineered Lactobacillus. After comparing the diameter of the auras of ampicillin, chloramphenicol and tetracycline antibiotic disks with engineered lactobacillus and performing statistical analysis, no significant difference was reported. Considering that the presence of Tachyplesin gene in Lactobacillus acidophilus was confirmed, the resulting growth inhibition zone around Salmonella indicates that the expression and secretion of Tachyplesin gene in Lactobacillus has an antibiotic-like effect on Salmonella.