تشخیص ملکولی تیلریا آنولاتا و تیلریا اورینتالیس در گاوهای شهرستان شهرضا، جنوب استان اصفهان
محورهای موضوعی : پاتوبیولوژی مقایسه ای
محمودرضا سلطانی
1
,
وحید نعمان
2
,
یاسر پیرعلی
3
,
حمیدرضا عزیزی
4
1 - .دانش آموخته کارشناسی ارشد رشته انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد ، ایران
2 - دانشیار، بخش بیماریهای انگلی دام، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
3 - استاد، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد ، ایران
4 - دانشیار، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد ، ایران
کلید واژه: ایران, استان اصفهان, گونه‌های تیلریا, گاو, تشخیص ملکولی,
چکیده مقاله :
تیلریا ها از انگل‌های خونی مهم گاو می‌باشند که توسط کنه‌های ایکسودیده منتقل‌شده و در دام‌های بیمار باعث تظاهرات بالینی خفیف تا بسیار کشنده می‌شوند. هدف از این مطالعه تعیین گونه‌های تیلریا در شهرستان شهرضا در جنوب استان اصفهان بود. درمجموع تعداد 253 نمونه خون از طریق رگ گوش و رگ وداج گاوهای به‌ظاهر سالم به‌طور تصادفی به ترتیب برای آزمون میکروسکوپی و ملکولی اخذ شد. در ابتدا DNA استخراجی از نمونه‌های خونی با جفت آغازگری که قطعه حدود 400 جفت بازی از ژن 18S rRNA جنس تیلریا را تکثیر می‌کرد، تکثیر شد. تمامی نمونه‌های مثبت با semi-nested PCR اختصاصی ازنظر وجود تیلریا آنولاتا و تیلریا اورینتالیس بررسی شدند و آلودگی نمونه‌ها ازنظر تیلریا آنولاتا و تیلریا اورینتالیس به ترتیب 9/54% و 47% تشخیص داده شد. آزمون مربع کای جهت مقایسه میزان شیوع نسبت به فصل سال، نوع دامداری، بهداشت دامداری، ناقلین بندپا، سن دام و تولید شیر انجام شد. در مقایسه فراوانی گونه تیلریا اورینتالیس در گاو بین فصول مختلف نمونه‌گیری، حضور ناقلین و سطح بهداشتی دامداری اخلاف معنی‌داری مشاهده شد (p <0.05). بیشترین فراوانی به ترتیب مربوط به فصل بهار، حضور کنه و سطح بهداشتی معمولی دامداری بود. در مقایسه آزمون میکروسکوپی با آزمون ملکولی، حساسیت و ویژگی آزمون میکروسکوپی به ترتیب 39/14 و 12/99 درصد تعیین گردید. محاسبه ضریب کاپا بین آزمون ملکولی و میکروسکوپی تیلریا (50 فیلد) نشان‌دهنده سطح ضعیف توافق دو آزمون بود (Kappa= 0.124). این مطالعه اولین مطالعه تشخیص ملکولی گونه‌های تیلریا در گاوهای منطقه جنوب اصفهان است.
Theileria are important hemoprotozoan parasites of cattle, transmitted by ixodid ticks leading to diseases which range from mild in apparent reactions to highly fatal diseases. This study aimed to determine the variety of Theileria species among cattle of Shahreza city, the south part of Isfahan Province. A total of 253 blood samples were randomly collected via the ear vein and jugular vein from healthy cattle for microscopy and molecular examination, respectively. The extracted DNA from blood cells was amplified by Theileria-all primers, which amplify an approximately 400bp DNA fragment from the region of the 18S rRNA gene from various members of the genus Theileria. All cattle positive samples were further analysed for the presence of Theileria annulata and Theileria orientalis by specific semi-nested PCR. T. annulata and T. orientalis were identified by specific semi-nested PCR in 54.9% and 47% of cattle blood samples, respectively. Chi-square (x2) tests were used to compare molecular prevalence values relative to Season, Farm, Type, Hygiene, Vectors, Age, and Milk Yield. T. orientalis prevalence was significantly higher in cattle in summer as compared to those in other seasons (p < 0.05). The prevalence rates of T. orientalis in different seasons, hygiene levels, and vectors were significantly different (p < 0.05). T. orientalis prevalence was higher in spring, farms with tick vectors and normal level of Hygiene. The examination of 50 microscopic fields showed 14.39% sensitivity and 99.12% specificity compared to molecular examination. The Kappa coefficient between molecular and microscopy (50 fields) techniques indicated a poor level of agreement (Kappa= 0.124). This study is the first molecular detection of Theileria species from cattle in the south of Isfahan province, Iran.
1- Kiara H, Steinaa L, Nene V, Svitek N. Theileria in ruminants. In: Florin-Christensen M, Schnittger L, editors. Parasitic Protozoa of Farm Animals and Pets. Switzerland: Springer; 2018. p. 187-213.
2- Ghaemi P, Hoghooghi-Rad N, Shayan P, Eckert B. Detection of Theileria orientalis in Iran by semi-nested PCR. Parasitology Research. 2012;110(2):527-531.
3- Watts J, Playford M, Hickey K. Theileria orientalis: a review. New Zealand Veterinary Journal. 2016;64(1):3-9.
4- Mans BJ, Pienaar R, Latif AA. A review of Theileria diagnostics and epidemiology. International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife. 2015;4(1):104-118.
5- Soosaraei M, Haghi MM, Etemadifar F, Fakhar M, Teshnizi SH, Hezarjaribi HZ, et al. Status of theileriosis among herbivores in Iran: A systematic review and meta-analysis. Veterinary World. 2018;11(3):332.
6- Shayan P, Rahbari S. Simultaneous differentiation between Theileria spp. and Babesia spp. on stained blood smear using PCR. Parasitology Research. 2005;97(4):281-286.
7- Gubbels J, De Vos A, Van der Weide M, Viseras J, Schouls L, De Vries E, et al. Simultaneous Detection of BovineTheileria and Babesia Species by Reverse Line Blot Hybridization. Journal of Clinical Microbiology. 1999;37(6):1782-1789.
8- Georges K, Loria G, Riili S, Greco A, Caracappa S, Jongejan F, et al. Detection of haemoparasites in cattle by reverse line blot hybridisation with a note on the distribution of ticks in Sicily. Veterinary Parasitology. 2001;99(4):273-286.
9- Abdela N, Bekele T. Bovine theileriosis and its control: a review. Advance Biology Research. 2016;10(4):200-212.
10- Nourollahi-Fard SR, Khalili M, Ghalekhani N. Detection of Theileria annulata in blood samples of native cattle by PCR and smear method in Southeast of Iran. Journal of Parasitic Diseases. 2015;39(2):249-252.
11- Majidiani H, Nabavi R, Ganjali M, Saadati D. Detection of Theileria annulata carriers in Holstein–Friesian (Bos taurus taurus) and Sistani (Bos taurus indicus) cattle breeds by polymerase chain reaction in Sistan region, Iran. Journal of Parasitic Diseases. 2016;40(4):1184-1188.
12- Khatoon S, Kolte S, Kurkure N, Chopde N, Jahan A. Detection of tropical bovine theileriosis by polymerase chain reaction in cattle. Journal of Parasitic Diseases. 2015;39(1):53-56.
13- Saeed Z, Iqbal F, Hussain M, Shaikh RS, Farooq U, A. A, et al. Molecular Prevalence and Haematology of Tropical Theileriosis in Cholistani Cattle from Nomadic Herds of the Cholistan Desert, Pakistan. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi. 2016;22(2):281-286.
14- Noaman V. Comparison of molecular and microscopic technique for detection of Theileria spp. in carrier cattle. Journal of Parasitic Diseases. 2014;38(1):64-67.
15- Narimani B, Hoghooghi-Rad N, Shayan P, Rahbari S. Molecular and Microscopic Detection of Theileria spp. among Cattle and Buffaloes in West Azarbaijan, Iran. Archives of Razi Institute. 2017;72(3):189-195.
16- Devadevi N, Rajkumar K, Vijayalakshmi P, Perumal SV. Molecular Studies on Bovine Benign Theileriosis (Theileria orientalis) in Cattle of Puducherry Region. Journal of Animal Research. 2018;8(3):393-397.
17- Jirapattharasate C, Moumouni PFA, Cao S, Iguchi A, Liu M, Wang G, et al. Molecular epidemiology of bovine Babesia spp. and Theileria orientalis parasites in beef cattle from northern and northeastern Thailand. Parasitology international. 2016;65(1):62-69.
18- Zhou Z, Li K, Sun Y, Shi J, Li H, Chen Y, et al. Molecular epidemiology and risk factors of Anaplasma spp., Babesia spp. and Theileria spp. infection in cattle in Chongqing, China. PLoS One. 2019;14(7).
19- Rizk MA, Salama A, El-Sayed SA-E-S, Elsify A, El-ashkar M, Ibrahim H, et al. Animal level risk factors associated with Babesia and Theileria infections in cattle in Egypt. Acta Parasitologica. 2017;62(4):796-804.
20- Noaman V, Abdigoudarzi M, Nabinejad AR. Abundance, diversity, and seasonal dynamics of hard ticks infesting cattle in Isfahan Province, Iran. Archives of Razi Institute. 2017;72(1):15-21.
_||_