طراحی کیت دات الایزا در جهت تشخیص آنتروتوکسین های (SEA) باکتری استافیلوکوکوس اورئوس و مقایسه آن با روش ساندویچ الایزا، تعیین صحت تشخیص آن در نمونه نان‌های خامه‌ایی

محورهای موضوعی : پاتوبیولوژی مقایسه ای

سارا السادات بطحایی ¹ , حامد اهری ² , سید امیرعلی انوار ³

1 - .دانشکده صنایع غذایی واحد علوم و تحقیقات دانشگاه آزاد اسلامی تهران ایران
2 - دانشیار دانشکده علوم کشاورزی و صنایع غذایی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران، ایران
3 - گروه علوم پایه و بهداشت دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران، ایران

تاریخ دریافت : 1400/02/12 تاریخ پذیرش : 1400/02/12 تاریخ انتشار : 1399/04/01

کلید واژه: کیت دات الایزا, استافیلوکوکوس اورئوس, آنتروتوکسین,

چکیده مقاله :

در این مطالعه تشخیص و شناسایی آنتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس به کمک طراحی کیت حساس Dot ELISA انجام شده است. در این مطالعه از کاغذهای نیتروسلولزی با منافذ 22/0 میکرون به‌عنوان بستر استفاده شده است، بر روی بستر یاد شده آنتی‌بادی اختصاصی آنتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس با رقت500/1 کوت گردیده و سپس توکسین اختصاصی به آنتی‌بادی‌های چسبیده شده مجاورت داده شده است؛ در ادامه آنتی‌بادی نشان‌دار شده با آنزیم HRP با رقت 2000/1 اضافه گردیده، باگذشت زمان و شستشوی مجدد، سوبسترا اضافه شد؛ در این آزمایش نمونه‌ها به‌صورت دستی آلوده شده و سپس با روش ساندویچ الایزا به‌ عنوان استاندارد طلایی مورد مقایسه قرار گرفت، این کیت قادر به تشخیص 50 نانوگرم بر میلی‌لیتر به بالا توکسین A بوده و چنانچه میزان توکسین کمتر از این مقدار باشد آن را به‌صورت منفی گزارش کرده، در این آزمایش از 40 نمونه جمع‌آوری‌شده، 4 نمونه مثبت گزارش‌شده، نشان می‌دهد که حدود 10 % نمونه‌های جمع‌آوری‌شده آلوده بوده است؛ امروزه با استفاده از کیت الایزا دات به‌عنوان روش سریع با حساسیت و ویژگی نسبی، می‌توان تکرارپذیری جهت تشخیص آنتروتوکسین A استافیلوکوکوس در نان‌های خامه‌ایی را بهبود بخشید.

چکیده انگلیسی:

In this study, detection and recognition of Staphylococcus aureus enterotoxin was performed by designing a Dot ELISA sensitive kit. In the present study, nitrocellulose membrane (NCM) with 0.22 micron pores was applied as the bed, and 1:500 diluted specific antibody of Staphylococcus aureus enterotoxin was coated on the NCM. Next, The HRP-tagged antibody was added with dilution of 1/2000, and the substrate was added gradually and rewashed. In this experiment, the samples were manually contaminated and then compared with the ELISA sandwich method as a gold standard. The kit is capable of detecting 50 ng/ml and higher of toxin A, and if the amount of toxin is less, it will report it negatively. In this test, of which 40 samples were collected and 4 positive cases were reported, it was revealed that about 10% of the collected samples were contaminated. Nowadays, using the Dot ELISA kit as a quick method with relative sensitivity and properties, it is possible to improve the repeatability of detecting Staphylococcus enterotoxin A in creamy candies.

منابع و مأخذ:

1. Nikniaz Z, Mahdavi R, Jalilzadeh H, Vahedjabari M. Investigation of microbial load of creamy bread offered in Tabriz confecneries. Food science and nutrition. 1389; 8(1).


2. Betley MJ, Harris TO. Staphylococcal enterotoxins: genetic characterization and relationship between structure and emetic activity. Food microbiology. 1994; 11(109-121).


3. Hui YH,  Pierson  MD,  Graham  JR. Food born disease hand book 2th edition. 2001; (107-137).


4. Ahmady M, Kazemi S. Detection of the enterotoxigenic genes (sei,sej) in Staphylococcus aureus isolates from bovine mastitis milk in the West Azerbaijan of Iran. Comp Clin Path. 2013;22(4):649–54.


5. Cook E, Wang X, Robiou N, Fries BC. Measurement of Staphylococcal Enterotoxin B in Serum and Culture Supernatant with a Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ᰔ. 2007;14(9):1094–101.


6. Hassani S, Doust RH, Mobarez AM. Enterotoxin A Gene Barrier Staphylococcus aureus Within Traditionally Dairy Products of Tehran. 2014;2(4).


7. Tasci F, Sahindokuyucu F, Ozturk D. Detection of Staphylococcus species and staphylococcal enterotoxins by ELISA in ice cream and cheese consumed in Burdur Province. African J Agric Res. 2011;6(4):937–42.


8. Anvar HASKSAA. Detection of Salmonella typhi using four developed kits of ELISA for cleaning in place purification. Int J Environ Sci Technol. 2017;


9. Singh M, Agrawal RK, Singh BR, Mendiratta SK, Agarwal RK, Singh MK, et al. Development and Evaluation of Simple Dot–Blot Assays for Rapid Detection of Staphylococcal Enterotoxin-A in Food. Indian J Microbiol. 2017;57(4):507–11.


10. Kuang H, Wang W, Xu L, Ma W, Liu L, Wang L, et al. Monoclonal antibody-based sandwich ELISA for the detection of staphylococcal enterotoxin A. Int J Environ Res Public Health [Internet]. 2013;10(4):1598–608. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3709337&tool=pmcentrez&rendertype=abstract


11. Nagaraj S, Ramlal S, Kingston J, Batra HV. Development of IgY based sandwich ELISA for the detection of staphylococcal enterotoxin G (SEG), an egc toxin. Int J Food Microbiol [Internet]. 2016;237:136–41. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2016.08.009


12. Wu S, Duan N, Gu H, Hao L, Ye H, Gong W, et al. A review of the methods for detection of Staphylococcus aureus enterotoxins. Toxins (Basel). 2016;8(7).


13. Nia Y, Rodriguez M, Zeleny R, Herbin S, Auvray F, Fiebig U, et al. Organization and ELISA-based results of the first proficiency testing to evaluate the ability of european union laboratories to detect staphylococcal enterotoxin type B (SEB) in buffer and milk. Toxins (Basel). 2016;8(9).


14. Nouri A, Ahari H, Shahbazzadeh D. Designing a Direct ELISA Kit for the Detection of Staphylococcus Aureus Enterotoxin A in Raw Milk Samples from Tehran Province. Int J Biol Macromol [Internet]. 2017; Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.10.052