انتقال هدایت شده و بیان اختصاصی هورمون کلسی تونین انسانی در غده سیب زمینی تراریخته
محورهای موضوعی : بیوتکنولوژی و میکروبیولوژی کاربردی
کلید واژه: زراعت مولکولی, کلسی تونین انسانی, پروموتر Patatin, سیب زمینی تراریخته. (Solanum tuberosum),
چکیده مقاله :
گیاهان به دلیل داشتن مسیر اصلاحات پس از ترجمه مشابه سلول های جانوری، سیستمی ارزان جهت تولید پروتئین های نوترکیب در مقیاس بالا را فراهم نموده اند. هدف این تحقیق بررسی بیان اختصاصی هورمون داروئی کلسی تونین انسانی(hCT) که در درمان بیماری های استخوانی نقش دارد در غده گیاه سیب زمینی(Solanum tuberosum) به عنوان میزبان بود. ژن سنتتیک کلسی تونین با توالی بهینه سازی شده بر اساس رمز های ترجیحی میزبان تحت کنترل پروموتر ژنClass I Patatin با قابلیت ابراز اختصاصی در غده سیب زمینی و خاتمه دهندهNOS قرار گرفت و پس از کلون سازی در ناقل دوتایی از طریق آگروباکتریوم به غده گیاه سیب زمینی منتقل گردید. پس از تراریختی و تکثیر، نسل اول گیاهان تراریخته از نظر وجود ژن فوق توسط PCR و نیز میزان بیان پروتئین نوترکیب هدف بوسیله ELISA مورد بررسی قرار گرفت. بیشترین بیان حاصل از واریته کاردال، با بیانی معادلng 5/1بود.
Molecular farming as a new and promising industry involvs plant biotechnology for the production of valuable pharmaceutical proteins in plants. Transgenic plants offer many advantages as low-cost system for large-scale production. The ability to carry out post translational modification similar to animal cells, the absence of human pathogens and low production costs are some of the advantages of plants. Among bioactive peptide, human calcitonin (hCT) hormone plays an important role for the treatment of disorders of bone and mineral metabolism, so its production in different hosts is attractive. The aim of this project was to investigate the organ specific expression of hCT gene in transgenic potato tuber. In this way, the expression cassette containing the synthetic hCT gene with optimized codon for plant expression under the control of class I Patatin promoter and Nos terminator was cloned in plant binary vector. The chimerical construct was integrated into potato plant chromosome by Agrobacterium mediated transformation. After regeneration, transgenic potato plants analyzed for the sense of hCT gene with PCR and the organ specific expression of human calcitonin were determind by ELISA . The highest level of expression was see with 1.5 ng protein per total soluble protein in tubers.
_||_