مطالعه تنوع ژنتیکی جدایه های بالینی مایکوباکتریوم فورچوئیتوم بر اساس تکنیک RAPD-PCR
محورهای موضوعی : باکتری شناسی
رسا شینی محراب زاده
1
,
آذردخت خسروی
2
,
عبدالرزاق هاشمی
3
,
هوشنگ جمالی
4
1 - کارشناس ارشد، دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم، گروه میکروب شناسی
2 - استاد، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، گروه میکروب شناسی
3 - استادیار، مرکز تحقیقات بیماری های عفونی و گرمسیری اهواز
4 - استادیار، دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم، گروه ایمنی شناسی
کلید واژه: مایکوباکتریوم فورچوئیتوم, RAPD-PCR, تایپینگ مولکولی,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: امروزه مایکوباکتریوم های غیرتوبرکلوزی (NTM)، به دلیل افزایش شیوع بیماری زایی و ظهور مقاومت های آنتی بیوتیکی اهمیت فراوان یافته اند. رایج ترین مایکوباکتریوم غیرسلی در ایران ، مایکوباکتریوم فورچوئیتوم می باشد. این مطالعه با هدف شناسایی مولکولی و بررسی تنوع ژنتیکی در میان جدایه های بالینی مایکوباکتریوم فورچوئیتوم در ایران با استفاده از روش RAPD-PCR انجام شد. مواد و روش ها: این مطالعه به صورت مقطعی- توصیفی بر روی 81 ایزوله NTM جداسازی شده از نمونه های مختلف بالینی انجام شد. به منظور شناسایی اولیه مایکوباکتریوم فورچوئیتوم از رنگ آمیزی اسیدفست و تست های رایج بیوشیمیایی استفاده گردید. جدایه ها با روش PCR تایید شدند و محصولات PCR به وسیله 3 آنزیم برش دهنده AvaII، HphI وHpaII هضم گردیدند. در نهایت تیپ بندی مولکولی جدایه های مایکوباکتریوم فورچوئیتوم به کمک آنالیز RAPD انجام شد. یافته ها: از مجموع 81 ایزوله NTM بررسی شده، 36 سویه به عنوان مایکوباکتریوم فورچوئیتوم شناسایی شدند. این سویه ها بر اساس پرایمرهای RAPD در 10 خوشه اصلی قرار گرفتند. بیشتر جدایه ها در رپید تایپ 1 (9 عضو ، 25%)، 2 (8 عضو ، 22.2%) و 6 (6 عضو ، 16.6%) طبقه بندی شدند. در آنالیز رپید، قطعه اصلی 300 جفت بازی (94.4%) و پس از آن قطعه 1000 جفت بازی (66.6%) وجود داشت. نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر، قدرت تمایزی بالای RAPD-PCR را نشان می دهد. این آنالیز می تواند تنوع ژنتیکی و اطلاعات اپیدمیولوژیکی را در مورد جدایه های مایکوباکتریوم فورچوئیتوم ارائه دهد. آنالیز RAPD ساده، سریع، ارزان و پیچیدگی کمتری نسبت به سایر روش های تیپ بندی مولکولی دارد.
Background and Objectives: Non-tuberculosis Mycobacteria (NTM) are important due to increase in the rate of clinical outbreaks and emerging antibiotic resistance. Mycobacterium fortuitum is the most common NTMs in Iran. This study was aimed to molecular detection and genetic diversity of clinical isolates of M. foruitum in Iran using RAPD-PCR method. Materials and Methods: This cross-sectional study was carried out on 81 isolates of NTM isolated from various clinical samples. The primary identification of M. fortuitum was performed based on Acid Fast staining and routine biochemical tests. After confirmation of the isolates based on PCR, the PCR products were digested with AvaII, HphI and HpaII. The molecular typing of the M. fortuitum isolates were performed using PAPD analysis. Results: Out of 81 tested NTM, 36 strains were confirmed as M. fortuitum. Based on RAPD primers, these isolates were classified into 10 main clusters. Most of the isolates were distributed into RAPD types of 1 (9 members, 25%), 2 (8 members, 22.2%) and 6 (6 members, 16.6%). In RAPD analysis, the major fragments were 300 bp (94.4%), followed by fragment 1000 bp (66.6%). Conclusion: The results showed high discriminatory ability of RAPD–PCR method. This analysis is able to sufficiently discriminate the genotypic diversity and to prepare epidemiologic information of the M. fortuitum isolates. RAPD techniques is simple, rapid, inexpensive, and is less complicated than most of other molecular typing methods.