ایجاد سازواره ژنی گلوکاناز باکتری باسیلوس سوبتیلیس در اشریشیا کلی

محورهای موضوعی : میکروب شناسی مولکولی

مرضیه شاولی ¹ , عباس دوستی ²

1 - کارشناس ارشد، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهرکرد، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی
2 - دانشیار، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهرکرد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی

تاریخ دریافت : 1393/10/30 تاریخ پذیرش : 1393/12/20 تاریخ انتشار : 1394/10/11

کلید واژه: باسیلوس سوبتیلیس, β-گلوکاناز, همسانه‌سازیT/A,

چکیده مقاله :

سابقه و هدف: غلات به عنوان تغذیه اصلی طیور مطرح می باشد. غلات دارای میزان قابل توجهی پلی‌ساکارید غیرنشاسته‌ای (NSP) محلول می‌باشند. NSP منجر به افزایش اثرات منفی و ناسازگاری در طیور می‌شوند. مکمل آنزیمی بتاگلوکاناز با تجزیه‌ پلی‌ساکاریدهای غیرنشاسته‌ای ویسکوزیته محتویات هضمی دستگاه گوارش را کاهش می‌دهد و جذب روده‌ای را بالا می‌برد. این مطالعه با هدف ایجاد سازواره‌ ژنی گلوکاناز باکتری باسیلوس سوبتیلیس در باکتری اشریشیا کلی انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و روش واکنش زنجیره‌ای پلی مراز توالی کامل ژن گلوکاناز از باکتری باسیلوس سوبتیلیس تکثیر شد. پس از خالص سازی، ژن bgl با استفاده از روش T/A Cloning در وکتور pGEM کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pGEM-bgls در باکتری اشریشیا کلی سویه Top-10 ترانسفورم شد. باکتری ترانسفورم شده به محیط جامد LB محتوی آمپی سیلین (100 میکروگرم در هر میلی لیتر) منتقل شد. پلاسمید نوترکیب ترانسفورم شده در اشریشیا کلی سویه Top-10 و کلنی های حاوی پلاسمید به روش PCR انتخاب شد. تایید نهایی سازواره حاصل به روش هضم آنزیمی صورت گرفت. یافته ها: نتایج نشان داد که همسانه‌سازی ژن گلوکاناز در باکتری اشریشیا کلی به درستی صورت گرفته است. واکنش زنجیره‌ای پلی مراز همسانه سازی ژن 767 جفت بازی گلوکاناز را تایید نمود. نتیجه گیری: این پژوهش با ساخت سازواره ژنی گلوکاناز از باکتری باسیلوس سوبتیلیس و کلون کردن آن در باکتری اشریشیا کلی می‌تواند کاندیدای جدیدی در تولید پروبیوتیک برای دام و طیور معرفی نماید.

چکیده انگلیسی:

Background & Objectives: The grains are considered as the main food for poultries. Grains contain significant content of non- soluble starch polysaccharides (NSP). NSPs cause negative impact and incompatibility in birds. Digestion of NSP contents by β-glucanase enzyme supplement reduces the viscosity of polysaccharides in the digestive tracts, and increases their intestinal absorption. The aim of this study was to construction of glucanase gene of Bacillus subtilis in Escherichia coli. Materials & Methods: In this experimental study, the glucanase gene of B. subtilis was amplified using specific primers and polymerase chain reaction. After purification of the bands, Bgl gene was cloned by T/A cloning technique in pGEM vector, and was transformed in E. coli. Afterward, the pGEM-bgl was transferred into E. coli Top-10 strain. The recombinant vectors were then transformed into E. coli competent cells, and the recombinants were plated on LB agar containing 100 µg/ml ampicillin. The recombinant plasmid transformed to E. coli Top10 cell and the colonies carrying plasmid were selected by PCR. The presence of glucanase construction was confirmed by enzymatic digestion. Results: The results showed that the glucanase gene was successfully cloned in E. coli. The results of cloning of 767 bp glucanase gene was confirmed by PCR assay. Conclusion: The construction of  B. subtilils glucanase gene and cloning of this gene in E. coli is a strong alternative for the production of  probiotic used for poultry.